본 발명은 삼배체 무지개송어 수정란의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 삼배체 무지개송어 수정란의 제조 방법을 이용 시, 국내에서 효율적인 방법으로 삼배체 무지개 송어 수정란을 수득할 수 있어, 외국에서 도입되는 삼배체 무지개송어 수정란의 이송에 따른 낮은 부화율을 해결할 수 있고, 외국란 도입에 따라 함께 유입될 수 있는 무지개 송어 관련 난치병 질환 도입을 근본적으로 해결할 수 있다. 또한, 국내 생산되는 양식산업에서 비효율적인 이배체 동란(冬卵)의 문제점을 해결할 수 있어, 관련 사업에 유용하게 이용될 수 있다.